熒光顯微鏡檢測支原體
熒光顯微鏡檢測支原體 | 時間: December-7 11:30:41 | 分類:技術欄目
凌儀生物提供高速離心機，美國Bio-rad伯樂電泳，德國eppendorf艾本德移液器，美國ABI基因擴增儀PCR，雅培原位雜交儀，Thermo熱電離心機等實驗室儀器設備，以及Corning康寧，Axygen愛思進，Greiner格瑞拉等耗材要省錢，別錯過哦。檢測支原體有兩種不同的策略:第一種方法將在下述方案中述及，利用對DNA染
色的熒光染料Hoechst 33258，它對細胞核周圍(在細胞表面或胞質中)的特殊DNA物
質進行染色，可顯示支原體污染;第二種方法是利用D}LA探針識別細胞提取物中的
DNA支原體特異序列，進行支原體污染的檢測。對這個方案，照試劑供應商(Fisher
Scientific)的說明進行。
1)準備下列液體，然后除菌并冷藏。
無酚紅的HBSS
NaCI 8g
KCI 0.4g
葡萄糖1.0g
Hoecbot 10x1 x儲存液
溶解5mg Hoechst 3328于100mHBSS中，使其終濃度為5。
D.1mol/L檸檬酸22.2ml
用檸檬酸或N4調節pH為5.5
2)滴人1一2滴胰蛋白酶消化細胞于培養皿中的iWek玻片上或蓋玻片L}
3y加人1一2r}培養液覆蓋表面，讓細胞生長2一3天。
4)準備Cat}ay固定液(應在每次用前制備新鮮的
3份甲醉
1份冰
5}吸干培養液，不用洗滌單層細胞并直接加人Carnoy固定液于La}tek室內或培養皿中。培養皿中充滿Camoy固定液(約}III} } O室溫中放置平皿2分鐘去除培養皿中液體。加入新鮮固定液以充滿室內或培養皿中(約5m1 }室溫中放
