微型瓊脂糖凝膠電泳槽的簡易制作
微型瓊脂糖凝膠電泳槽的簡易制作 | 時間: December-11 14:34:09 | 分類:技術(shù)欄目
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以有機(jī)玻璃板等材料，制作出成奉低廉的微型瓊脂糖凝膠電泳槽。經(jīng)試用，具有操作簡便、使用安全、節(jié)省試劑等優(yōu)點(diǎn)，能滿足教學(xué)與科研的需要。
瓊脂糖凝膠電泳是核酸研究工作中必不可少的工具，在生物化學(xué)和分子生物學(xué)教學(xué)和科研中具有重要作用。瓊脂糖凝膠電泳槽的制作原理雖簡單，但由于瓊脂糖凝膠電泳槽梳子的制作工藝較復(fù)雜，且鉑金電極價格較高，使目前市場上商品化的瓊脂糖凝膠電泳槽價格較高。
本文作者對瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)進(jìn)行了研究，完成了微型瓊脂糖凝膠電泳槽的改進(jìn)制作。制作出的瓊脂糖凝膠電泳槽具有成本低、檢測迅速、使用安全、節(jié)省試劑、電泳譜帶清晰等優(yōu)點(diǎn)，能滿足生物化學(xué)和分子生物學(xué)教學(xué)實(shí)驗(yàn)的需要，并已在核酸酶切研究中得到進(jìn)一步應(yīng)用。
1 制作方法
瓊脂糖凝膠電泳槽的制作分為4部分：電泳槽的制作；制膠槽的制作；梳子的制作和蓋子的制作。制膠槽和梳子在數(shù)量和規(guī)格上可以根據(jù)實(shí)際工作需要適量增減，以便于實(shí)驗(yàn)操作。
1．1 電泳槽的制作
選取透明的有機(jī)玻璃盒或塑料盒，大小以120mm×lO0mm×50mm左右為佳。在盒子兩端同側(cè)各打一孔裝上電極插孔，并在兩端部各用膠布固定一根細(xì)銅絲(膠布只在盒子的角部固定銅絲)，即制成瓊脂糖凝膠電泳槽。見圖1。
1．2 制膠槽的制作
截取2 3一厚的透明有機(jī)玻璃板，在電熱絲上加熱，折成“u”形，即成制膠槽。制膠槽兩側(cè)板高度以20—25mm為宜。間距應(yīng)略小于電泳槽；制膠槽的長度約為70—90mm 。見圖1。
1、3 盞子的制作
用有機(jī)玻璃做一“L 形上蓋，并在電極插孔的相應(yīng)位置上打孔，安裝電極插頭，并將插頭固定于上蓋的倒板上。見圖2。
1．4 梳子的制作
選取厚度適宜(1-2m )的透明有機(jī)玻璃板，截成(3-5)mm×30mm的窄條，用于梳齒的制作。窄條的邊要光滑。以使制出的加樣孔比較整齊。取兩塊lO0mm×15mm有機(jī)玻璃板，分別折成“L’，形(長lOOmm，一側(cè)寬5mm，另一側(cè)寬10mm)。將兩塊折成“L”形的有機(jī)玻璃板5mm寬一側(cè)相對，橫跨于制膠槽上，在制膠槽的底面墊上1—1．5zr~m厚的有機(jī)玻璃薄板，將制好的窄條以2-3mm的間距分別平行固定于兩根“L”形板條的5mm寬一倒，窄條下端應(yīng)整齊地落在墊板上，(注意：兩側(cè)窄條與制膠槽應(yīng)保持2—3mm的間距。)用氯仿固定。
2 使用方法
(1)將制膠槽兩端用膠布封好，以純水檢測是否封嚴(yán)；
(2)在合適的位置放好梳子；
(3)加入制好的瓊脂糖制成凝膠；
(4)去掉梳子和膠布，將制膠槽放入電泳槽中：
(5)在一側(cè)緩緩加人電泳緩沖液，至液面高于膠面lmm；
(6)接通電源，在100～150V電泳，20min后檢測、觀察電泳結(jié)果。
3 電泳槽性能
用本文方法制作的瓊脂糖凝膠電泳槽具有以下優(yōu)點(diǎn)：
(1)成本低。總成本約為l0—20元，是同類市場商品的1／20。
(2)能節(jié)約電泳緩沖液用量，一次僅需要160mL左右。
(3)電泳檢測迅速，采用100～150V電壓，20min即可得到檢測結(jié)果。
(4)電泳槽各部件可以互換使用，便于維修。
(5)梳子位置可以隨意調(diào)整，使用方便。
(6)凝膠取出方便，并可在制膠槽中直接進(jìn)行檢測。
(7)打開電泳槽蓋子時自動斷電，可保證安全。
4 應(yīng)用
該裝置已在生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中試用，在質(zhì)粒DNA的分離檢測、DNA酶切片段的電泳檢測、連接酶連接結(jié)果檢測、重組質(zhì)粒檢測等教學(xué)實(shí)驗(yàn)中．均取得很好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。通常的瓊脂糖凝膠電泳槽在制作中常使用價格較高的鉑金絲電極，本文裝置利用銅絲代替鉑金絲，能滿足實(shí)驗(yàn)需要．并可大幅度降低成本。但應(yīng)注意在使用過程中需及時更換銅絲。本裝置成本低、電泳緩沖液用量少，適用于科研和教學(xué)經(jīng)費(fèi)不足、用量又很大的單位。
