美國Bio-Rad Trans-Blot SD型半干轉印系統操作使用說明
美國Bio-Rad Trans-Blot SD型半干轉印系統操作使用說明 | 時間: February-24 21:42:00 | 分類:技術欄目
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美國Bio-Rad公司的Trans-Blot SD型半干轉印系統是在電場的作用下把聚丙烯酰胺凝膠或瓊脂糖凝膠上的蛋白或核酸條帶轉移到硝酸纖維素膜上，其運用了電泳檢測的方法，使得蛋白或核酸從凝膠中進行分離轉移到硝酸纖維素膜上，由于硝酸纖維素膜的可支撐性，使得蛋白或核酸條帶能夠在電泳后繼續做雜交等后續檢測的實驗，是一種普通，簡單，快速的轉印方法。該系統無需緩沖液池或凝膠盒，可達到快速、有效、經濟的轉印目的。平板電極提供一致可靠的轉移，可轉移多塊凝膠，安裝快速方便。
二.用途：
主要應用于分子生物學實驗，定量和定性分析基因表達，和特定蛋白質表達，用于相關的Northern雜交、Southern雜交和Western雜交分析方法，可在10-35分鐘內完成。
半干轉印槽和 PowerPac通用電泳儀
三.使用：
準備緩沖液、凝膠
1．根據凝膠平衡、三明治裝置、電泳過程等所需要的緩沖液用量準備足夠的緩沖液。
2．使用去離子水浸潤凝膠，并在轉印緩沖液中平衡15min。
所用凝膠須在緩沖液中平衡，除去電泳過程中所帶的鹽分；在轉印過程中，這些鹽會引起轉印緩沖液導電性升高，產生大量的焦耳熱。不同濃度的凝膠和不同的緩沖液組分，會引起凝膠的收縮和膨脹，因此平衡過程可以使凝膠調整到電轉印前較合適的尺寸大小。當電泳緩沖液和轉印緩沖液組分相同時，可不進行平衡過程（如，非變性凝膠）。將凝膠、印記膜夾放在兩層濾紙中間形成三明治結構。
如果使用超厚濾紙，每側則只需要1張;如果使用超厚或薄的濾紙，每側則需要2－3張。
半干轉印系統中，濾紙起到存儲電轉印緩沖液的作用，因此用量的多少非常重要。為避免污染，請佩戴手套接觸凝膠、印記膜和濾紙。
3．相對于每一張凝膠，需要按尺寸裁減出一張印記膜、兩到六張濾紙。Bio-Rad公司提供了預切膜和濾紙。
4．在電轉印緩沖液中潤濕濾紙。
5．將印記膜放入電轉印緩沖液中平衡。組裝三明治結構前，膜必須全部浸潤。硝酸纖維素膜可直接在轉印緩沖液中平衡；首先PVDF膜需要100％甲醇浸潤后，再在緩沖液中平衡。
6．小心打開安全蓋，取下陰極裝置。
7．將預先潤濕的超厚濾紙平房在陽極板上，用滾筒驅趕氣泡。如果使用厚或薄的濾紙，則疊加2－3張濕潤的濾紙，并驅趕氣泡。
8．將預先浸潤的印記膜小心放在濾紙上，驅趕氣泡。
9．將平衡后的凝膠放在印記膜上，將凝膠放在印記膜中央，如果凝膠超出印記膜外有所偏離，將不能達到全部轉印，要裁剪同樣尺寸的印記膜和濾紙。
放置后盡量不要移動轉印膜，以防止產生玷污印記和人為印跡。用滾筒驅趕氣泡，使凝膠和印記膜完全接觸。
10．在凝膠上方放入另外一塊潤濕后的超厚濾紙；如果使用厚或薄的濾紙，則疊放2－3張潤濕后的濾紙，并驅趕氣泡。擦干凝膠/印跡膜三明治結構外過量的緩沖液，以防止電流泄漏。
11．小心蓋上陰極蓋。
12．加蓋裝置的安全蓋。
轉印過程
13．接通電源，設置電泳儀參數，Mini-凝膠：10-15V/5.5mA/cm2, 10-30min；
大凝膠：15-25 V/5.5mA/cm2, 30-60min，開始轉印過程。
14．轉印結束后關閉電源，取下轉印夾，拆卸凝膠三明治裝配，用ddH2O清洗印記膜，確保膜上無剩余凝膠和樣品，之后進行樣品檢測、成像。
