美國伯樂bio-rad轉印槽使用方法步驟

美國伯樂bio-rad轉印槽使用方法步驟 | 時間: March-23 20:38:42 | 分類:技術欄目

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伯樂bio-rad轉印槽可快速、高質量地轉印小型凝膠。作為Mini-PROTEAN 3 電泳系統的一個組件，伯樂bio-rad轉印槽能容納2 個凝膠支架轉印夾，用于在Mini-PROTEAN 3 電泳槽內電轉印兩種小凝膠（Mini-PROTEAN 3 凝膠和ReadyGel 預制膠）。

　　伯樂bio-rad轉印槽特點包括：

　　1.1小時內轉印2 塊7.5 x 10 cm 凝膠；也可進行低強度的過夜轉印

　　2.電極絲相距4cm，以產生強電場保證有效的蛋白轉印

　　3.顏色標記的轉印夾和電極，確保轉印過程中凝膠的正確定向

　　4.內置bio-rad冷卻裝置，快速吸收轉移過程中產生的熱量

　　5.既可作為完整的獨立設備，又可作為一個模塊與 Mini-PROTEAN 3 轉印槽的緩沖液槽和蓋兼容

　　伯樂bio-rad轉印槽使用方法步驟：

　　全程請戴手套操作，以免污染伯樂bio-rad轉印槽！

　　1）電泳后SDS-PAGE 膠片浸在轉印緩沖液中，洗2~3 次，每次10min.

　　2）取出伯樂bio-rad轉印槽，先小心放一攪拌子在底部，再倒一半轉印緩沖液。

　　3）取轉印紙切成約如膠片大小，先在方形培養皿中以少許甲醇浸濕數秒鐘，再置入伯樂bio-rad轉印槽中的緩沖液10 min 后使用。另取兩張濾紙，以及兩片方形海綿墊，都放在伯樂轉印槽的緩沖液中備用。

　　4）取出轉印夾打開平放，先墊一張方形海棉墊，鋪上一張濕濾紙，小心平鋪SDS-PAGE膠上去，然后小心迭上已潤濕的轉印紙，用涂菌玻璃棒趕出氣泡；轉印紙再滴上數滴緩沖液后，加蓋一層濾紙，及另一張海綿，也都不可陷入氣泡，即可把整個轉印三明治卡夾裝好。

　　膠迭到轉印紙時，較好一次成功，不要重作，否則蛋白質色帶可能會印上去，較后產生重迭影像。

　　5）將轉印三明治置入已經放有一半轉印緩沖液的伯樂bio-rad轉印槽中，注意有轉印紙的那一面向正極（紅色），膠片那面向負極（黑色）。

　　6）當三明治都放入伯樂bio-rad轉印槽后，以轉印緩沖液蓋滿所有的三明治，小心動一動卡夾，除去附在卡夾內外的氣泡，蓋上蓋子，放到一攪拌器上，打開攪拌器開始攪拌，同時接好電源，裝置完成后放置10 min.

　　7）以300mA開始轉印，溫度會漸漸上升，轉印1.5 h左右后中止轉印，取出轉印三明治，打開后依次取出轉印紙及膠。

　　具體轉印條件要根據蛋白的大小進行優化，注意低溫。

　　8）轉印后的膠片可以繼續進行染色，看有無蛋白質殘留。若電泳時加有藍色標準蛋白質marker（SeeBlue），則可在轉印紙上看到藍色的色帶，確定轉印成功，并可評估轉印效率。