做電泳跑page、提取質(zhì)粒、做WESTERN BLOT時(shí)注意點(diǎn)

做電泳跑page、提取質(zhì)粒、做WESTERN BLOT時(shí)注意點(diǎn) | 時(shí)間: May-7 13:46:55 | 分類(lèi):技術(shù)欄目

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做電泳時(shí)注意容易出問(wèn)題，以下問(wèn)題要注意

1. 跑page膠的時(shí)候

小電壓跑會(huì)避免高電壓產(chǎn)生的熱量爾導(dǎo)致的膠層變形。低電壓泳道會(huì)比大電壓泳道跑的直一些，且分離效果更高，有利于分子量相差不大的蛋白分離。

2. 提取質(zhì)粒的時(shí)候

較后一步的酒精揮發(fā)很關(guān)鍵，基本上是其后續(xù)的酶切反應(yīng)的決定性因素。所以這一步盡量揮發(fā)長(zhǎng)一點(diǎn)時(shí)間，較好是空調(diào)吹熱風(fēng)，或是37度溫箱放長(zhǎng)一點(diǎn)的時(shí)間，我試過(guò)室溫過(guò)夜，酶切很好。

3. 做WESTERN BLOT 的時(shí)候

大家往往會(huì)摸索一抗、二抗的濃度，封閉時(shí)間，曝光時(shí)間等等，而每次變換其中的一個(gè)條件就需要從新跑膠、轉(zhuǎn)膜，甚至重新提蛋白，這樣會(huì)浪費(fèi)大量的時(shí)間。其實(shí)完全沒(méi)有必要這樣。一次轉(zhuǎn)膜后，將PVDF膜晾干，裁減成小塊，保存起來(lái)，用的時(shí)候取出一塊，沒(méi)有任何影響。這對(duì)于摸索條件的戰(zhàn)友來(lái)說(shuō)，節(jié)約了大量的時(shí)間。

 

 

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