葉綠素廠在提取葉綠素后的廢液小含有一定量胡蘿卜素，而且由于葉綠素被提取，在利用離心機分離胡蘿卜素時．可以減少葉綠素對胡蘿卜素的干擾。因此，這是比較好的提取胡蘿卜素的原料。胡蘿卜素常用的分離方法是氧化鋁柱層析。

1．廢液的預處理 取葉綠素廠廢液5mL于離心管中，置于低速冷凍離心機中，進行平衡操作后，1000 r/min離心15min。取上層黃色液體于50ml梨形分液漏斗中。加25ml石油醚(沸程為30一60℃)，充分混勻。 2．氧化鋁層析柱的準備 取100g氧化鋁于灰化爐中加熱至400℃，保持3h，使水分完全蒸發(fā)成活性氧化鋁。此時的氧化鋁為Ⅰ級，適當吸收空氣中的水分(約3％)后，成Ⅱ級，然后，用石油醚將活性氧化鋁調(diào)制成糊狀，備用。另取1支20 mm×300 mm的玻璃層析柱，關(guān)閉閥門，加入三分之一體積的石油醚、再將糊狀的話性氧化鋁慢慢地加入到玻璃層析柱中，同時打開層析柱的閥門，讓其中的石油醚慢慢地流出，有利于氧化鋁的沉降。當氧化鋁裝至層析柱的8D％時，停止加氧化鋁，待氧化鋁完全沉降。 3．加樣層析和洗脫 裝好層析柱，同時打開層析柱的閥門和分液漏斗的閥門，使分液漏斗中的樣品慢慢地加入到氧化鋁層析柱中。觀察氧化鋁由于加入樣品后顏色的變化。當前沿的顏色伸展至柱高度的二分之一時，關(guān)閉分液漏斗和層析柱的閥門，停止加樣。另取1個250mL分液漏斗，內(nèi)裝石油醚:丙酮＝9:l的混合溶液作為洗脫劑，安裝好層析裝置，分別打開分液漏斗和層析柱的閥門，讓洗脫劑慢慢流經(jīng)層析柱。當顏色前沿到達層祈柱底部時，注意觀察并記錄色帶的分離情況。第一條帶(從底部往上數(shù))，是α-胡蘿卜素，第二條帶是β-胡蘿卜素，第三條帶是γ—胡蘿卜素，再往上是其他類胡蘿卜素及其他色素。本實驗要求收集β-胡蘿卜素組分。用50mL燒杯收集β-胡蘿卜素洗脫液。 4.沉淀 將洗脫液于50℃水浴中加熱使溶劑揮發(fā)．然后，在殘留物中加lv仿使之溶解后再用乙醇沉淀，如發(fā)現(xiàn)有白色沉淀物質(zhì)產(chǎn)生，還需用低速冷凍離心機，控制轉(zhuǎn)速在2000r/min狀態(tài)下進行離心將其去除。在上清液中再加乙醇，得到的棕褐色沉淀，即為β-胡蘿卜素。稱量，記錄總重量。

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